强氧化剂(过氧亚硝基是强氧化剂!) 2。9。3乳蛋白的氧化产生的自由基 Mason实验室发展了利用ESRHPLC联用技术检测蛋白质氧化产生的自由基〔74〕。利用DMPO多克隆抗血清能够特异灵敏辨认蛋白质与DMPO产生的加合物的性质,他们研究了乳过氧化物酶(LPO)产生的自由基(图16)。 在DMPO存在时,LPO与GSH反应生成LPO自由基DMPO加合物,这个加合物的产生与GSH、LPO和DMPO及pH值有关,GSH不能用H2O2取代。加入叠氮钠、过氧化氢酶、维生素C、硫氰酸、I、亚硝酸盐,多酚加合物明显减少。 在LPOGSHDMPO体系中ESR自旋捕捉到一个GSH自由基信号,但是没有直接检测到蛋白质自由基的信号。加入叠氮钠、过氧化氢酶、维生素C、I、硫氰酸明显减少这一信号,而多酚和亚硝酸盐却增加这一信号。 GSH能明显改变LPO化合物II的波谱特征,表明GSH结合到化合物II的血红素上,而多酚和亚硝酸盐能够抑制这一改变把化合物II还原到天然酶,GSH还能抑制LPO的氧化活性。因此,这些结果表明这个自由基可能是通过硫氢基与化合物IId血红素反应形成的以血红素为中心的自由基被DMPO捕捉到的。 2。9。4糖胺聚糖氧化产生的自由基 过氧亚硝基过氧亚硝酸(ONOOONOOH)是强氧化剂,在炎症过程可以大量产生,氧化损伤细胞成分。Davies等人研究了ONOOONOOH与糖胺聚糖产生的产物。ONOOONOOH可以修饰透明质酸,肝素,软骨素,皮肤素和硫酸类肝素,但都依赖氧气。