直接从生物细胞基因组中获取目的基因最常用的方法是“鸟枪法”,又称“散弹枪法”。“鸟枪法”是将基因组按染色体分开后,将它全部打乱,切成碎片,进行随机测序,测序后再将它们拼接起来。它的好处是速度快,在很短的时间里就能拿到生物细胞基因组(例如人类基因组95的序列)。该法的思路独特,好像树林里停了一大群鸟,很多人乱枪射击,在很短的时间内,就可以将林子中的大部分鸟打中。“鸟枪法”又有点类似人们玩的拼图游戏。拼图游戏是将一个完整的画面分成杂乱无章的碎块,然后重新拼装复原。而“鸟枪法”则是先将整个基因组打乱,切成随机碎片,然后测定每个小片段序列,最终利用计算机对这些切片进行排序和组装,并确定它们在基因组中的正确位置。
鸟枪法是将目的DNA随机地处理成大小不同的片段,再将这些片段的序列连接起来的测序方法,属于第一代测序技术。
英文
Shotgunmethod
用途
“鸟枪法”最初主要用于测定微生物基因组序列。近年来,生物天才文特尔(CraigVenter)及其公司美国塞莱拉公司先后利用改进的全基因组“鸟枪法”完成了果蝇和人类基因组的测序工作,证明了它在测定大基因组上的可行性和有效性。
大致步骤
1。使用限制性核酸内切酶(简称限制酶)将带有目的基因的DNA链切成若干小段。
2。再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达。
3。如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段。
特点
“鸟枪法”优点是速度快,简单易行,成本较低。但用它来测序,最终排序结果的拼接组装不太容易。中国科学家设计出了一种序列组装软件,能有效克服“鸟枪法”全基因组测序组装过程中的困难。
在研究中,他们首先在整个水稻基因组上生成许多已知长度的DNA(脱氧核糖核酸)切片,然后...
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