质粒图谱（一分钟教你读懂质粒图谱）

　　质粒图谱（一分钟教你读懂质粒图谱）
　　质粒图谱为质粒DNA序列的物理图谱，提供了包括质粒的大小、筛选标记、克隆位点、转录及翻译元件等信息，为我们选择质粒、了解质粒特点及应用提供了重要依据。对于初学者来说改如何去阅读质粒图谱呢？今天来给大家讲解一下如何阅读质粒图谱，底部还有质粒、酶切切点选择的相关教学视频。
　　质粒的组成要素有哪些
　　复制起始位点：Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
　　抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp，Kan。
　　多克隆位点MCS：克隆携带外源基因片段。
　　PE启动子增强子
　　Terms终止信号
　　加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用
　　如何阅读质粒图谱
　　第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核真核穿梭质粒）。
　　第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
　　Ampr水解内酰胺环，解除氨苄的毒性。
　　tetr可以阻止四环素进入细胞。
　　camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
　　neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活。
　　hygr使潮霉素失活。
　　第三步：看多克隆位点（MCS）。
　　它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
　　第四步：再看外源DNA插入片段大小。
　　质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
　　第五步：是否含有表达系统元件，即启动子核糖体结合位点克隆位点转录终止信号。
　　这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
　　启动子核糖体结合位点克隆位点转录终止信号
　　启动子促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
　　增强子沉默子为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子负增强子，负调控序列。
　　核糖体结合位点起始密码SD序列（RbsAGUSDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。
　　转录终止顺序（终止子）翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点downstream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点downstream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
　　第六步：质粒图谱上的箭头。
　　有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上。